试题详情
- 简答题制造突变的主要分子生物学方法、原理是什么?
- (1)定点突变:定点突变技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。
几种寡核苷酸介导的基因突变方法:
①Kunkel 突变法 利用Kunkel 法以M13噬菌体DNA为载体进行寡核苷酸介导的位点特异性突变
②基于抗生素抗性“回复”的突变方法 ③基于去除特定限制酶切位点的突变
(2)蛋白质的体外分子定向进化
①易错PCR(Error prone PCR):通过改变PCR反应条件,如降低一种dNTP的量(降至5%-10%)、以dITP来代替被减少的dNTP、增加Mn2+和Mg2+的浓度或使用低保真度的DNA聚合酶等,使碱基在一定程度上随机错配而引入多点突变。
②DNA 搅乱重组(DNA shuffling):将来源不同但功能相同的一组同源基因,用核酸酶Ⅰ消化成随机片段,由这些随机片段组成一个文库,使之互为引物和模板进行PCR扩增,当一个基因拷贝片段作为另一基因拷贝的引物时,引起模板互换,重组因而发生,导入体内后,选择正突变体作为新一轮的体外重组。 关注下方微信公众号,在线模考后查看
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