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简答题概述测定蛋白质一级结构的基本步骤。
  • (1)测定蛋白质中氨基酸组成。
    (2)蛋白质的N端和C端的测定。
    (3)应用两种或两种以上不同的水解方法将所要测定的蛋白质肽链断裂,各自得到一系列大小不同的肽段。
    (4)分离提纯所产生的肽,并测定出它们的序列。
    (5)从有重叠结构的各个肽的序列中推断出蛋白质中全部氨基酸排列顺序。
    如果蛋白质含有一条以上的肽链,则需先拆开成单个肽链再按上述原则确定其一级结构。如是含二硫键的蛋白质,也必须在测定其氨基酸排列顺序前,拆开二硫键,使肽链分开,并确定二硫键的位置。拆开二硫键可用过甲酸氧化,使胱氨酸部分氧化成两个半胱氨磺酸。
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