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简答题在进行鱼类人工雌核发育诱导时,有哪些必须的步骤?各有哪些方法及特点?
  • 根据天然雌核发育鱼类的细胞学原理,进行人工雌核发育的诱导有两个关键技术:
    第一个是精子遗传物质失活。具体方法有:
    一.物理处理
    γ射线与x射线:
    原理:它们主要诱发染色体断裂;
    优势:二者具较好的穿透力,便于大量处理精子;
    缺陷:但经x、γ射线处理的精子生存力和受精能力都较差,在雌核发育;
    二.化学方法:
    1.常用药品有:甲苯胺兰、乙烯脲、二甲基硫酸盐
    2.应用效果:化学药物的处理效果不及辐射,在鱼类的雌核发育诱导中使用较少;但在无脊椎动物如贝类、虾蟹中曾有应用。
    第二个是卵子染色体加倍。具体方法有:温度休克和静水压及化学处理
    一.温度休克就是用高于(热休克)或低于(冷休克)卵子的最适发育温度的方法处理卵子的技术;
    温度休克的作用机制:主要是引起细胞内酶构型的变化,阻碍酶促反应而使细胞分裂时形成纺锤丝所需的ATP供应途径受阻,破坏微管的形成,使由微管蛋白聚合成的微管解体或阻止微管的聚合和染色体移动,从而抑制极体外排或细胞分裂;
    二.静水压的作用机制:破坏纺锤丝的微管亚单位而抑制极体外排或抑制有丝分裂;当施加压力时,有丝分裂器中的纺锤丝崩解,由蛋白质组成的微管解凝,纺锤体及星光随之消失,分裂受到抑制;
    当撤消压力后微管蛋白质重新聚集,纺锤丝接着形成,星光及纺锤体重新再现,分裂随之启动
    静水压的特点是:
    1.静水压一次处理的卵子数量少,对胚胎的损伤大,孵化率低,胚胎畸形率高;
    2.水压机的质量也参差不齐,严重影响诱导效果;
    3.但其易产生纯合个体,利于培育纯系,在科研中备受青睐;
    三.化学处理:1.原理:利用能够抑制细胞分裂的化学物质来干预细胞分裂过程
    2.常用药物:秋水仙素(Colchicine)、细胞松弛素-B(CB)、咖啡因(caffeine)等
    四.生物杂交:一般采用远缘杂交方法可以获得雌核发育二倍体。
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