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简答题简述等电聚焦电泳法的原理、特点。
  • 原理:不同的蛋白质等电点不同,如果分子处于pH和等电点一致的溶液中,则泳动就停止进行。如果溶液内的pH是位置的函数,或者说有一个pH的位置梯度,那么在一个稳定连续的线性pH梯度的溶液(两性载体电解质)中进行分离,每一种被分离的两性物质都移向与它的等电点相一致的pH位置,在那里不再移动(称为聚焦)。由于在这点净电荷(正负抵消)为零,因而又称等电聚焦。
    特点:①使用两性载体电解质,在电极之间形成稳定的、连续的、线性的pH梯度。
    ②由于“聚焦效应”,即使很小的样品也能获得清晰的、鲜明的区带界面③电泳速度快。
    ④分辨率高。⑤加入样品的位置可任意选择。
    ⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点。
    ⑦适用于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶等)生物组分的分离分析。
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