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简答题举例说明动物细胞培养产酶的工艺流程。
  • 现以人黑色素瘤细胞培养产生组织纤维酶原活化剂为例。说明动物细胞培养产酶的工艺过程及其控制。人黑色素瘤细胞培养采用Eagle培养基其工艺过程如下：
    （1）、将人黑色素瘤的种质细胞用胰蛋白酶消化处理，分散，用pH7.4的磷酸缓冲液洗涤，计数，稀释成细胞悬浮液；
    （2）、在消毒好的反应器中装进一定量的培养液，将上述细胞悬浮液接种至反应器中，接种浓度为（1~3）*1000个细胞/mL，于37℃的CO2培养箱中，通入含5%CO2的无菌空气，培养至长成单层致密细胞；
    （3）、倾去培养液，用pH7.4的磷酸缓冲液洗涤细胞2~3次；
    （4）、换入一定量的无血清Eagle培养液，继续培养；
    （5）、每隔3~4d，取出培养液进行tPA的分离纯化；
    （6）、然后再向反应器中加入新鲜的无血清Eagle培养液，继续培养，以获得大量tPA；
    （7）、从上述获得的培养液中采用亲和层析等技术进行分离纯化，获得组织纤溶酶原活化剂。

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