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简答题举例说明动物细胞培养产酶的工艺流程。
  • 现以人黑色素瘤细胞培养产生组织纤维酶原活化剂为例。说明动物细胞培养产酶的工艺过程及其控制。人黑色素瘤细胞培养采用Eagle培养基其工艺过程如下:
    (1)、将人黑色素瘤的种质细胞用胰蛋白酶消化处理,分散,用pH7.4的磷酸缓冲液洗涤,计数,稀释成细胞悬浮液;
    (2)、在消毒好的反应器中装进一定量的培养液,将上述细胞悬浮液接种至反应器中,接种浓度为(1~3)*1000个细胞/mL,于37℃的CO2培养箱中,通入含5%CO2的无菌空气,培养至长成单层致密细胞;
    (3)、倾去培养液,用pH7.4的磷酸缓冲液洗涤细胞2~3次;
    (4)、换入一定量的无血清Eagle培养液,继续培养;
    (5)、每隔3~4d,取出培养液进行tPA的分离纯化;
    (6)、然后再向反应器中加入新鲜的无血清Eagle培养液,继续培养,以获得大量tPA;
    (7)、从上述获得的培养液中采用亲和层析等技术进行分离纯化,获得组织纤溶酶原活化剂。
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