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简答题概述基因定点诱变的常用方法。
  • 目前常用的定位诱变方法主要有：
    （1）酶切诱变：先选择合适的限制酶将基因切开，然后插入或删除有关序列，可以在切点处改造基因序列。
    （2）寡核苷酸指导的诱变：a.制备单链DNA模板；b.合成诱变寡核苷酸；c.寡核苷酸与模板退火并合成异源双链DNA；d.将异源双链DNA插入合适的载体；e.转染宿主细胞；f.筛选和鉴定突变体。
    （3）PCR诱变：在引物中引入非配对碱基，通过PCR引物可以在扩增产物中引入点突变，嵌套式PCR还可以在基因内部或在一次PCR中同时在多处引入变异。各种变异，包括插入、删除、置换和重组，都可用PCR的方法来进行。

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