试题详情
- 简答题简答凝胶色谱柱分离主要步骤及操作。
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（1）凝胶的预处理
市售凝胶必须经过充分溶涨后才能使用，在烧杯中将干燥凝胶加水或缓冲液，搅拌、静置、倾去上层混悬液、除去过细的粒子。如此反复多次，直至上层澄清为止。
（2）层析柱的选择
层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度。
（3）凝胶柱的装填
进胶过程必须连续、均匀，不要中断，并在不断搅拌下使胶均匀沉降。
（4）样品处理和加样
分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4％一般约0.5-2ml，在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的20-30％；分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。加样时尽量减少样品的稀释及凝胶床面的搅动。
（5）洗脱与收集
整个洗脱过程中始终保持一定的操作压。流速不宜太快且要稳定。 关注下方微信公众号，在线模考后查看
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