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简答题免疫印迹法原理和需注意问题。
  • 免疫印迹法是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术，它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合，其操作可分成三个阶段：
    第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PACE）；第二阶段为电转移；第三阶段为酶免疫定位。
    需注意问题：
    ①许多单克隆抗体不能与变性抗原反应，因此免疫印迹实验中常选用多克隆抗体。
    ②在电泳之前应用免疫沉淀法将抗原进行纯化和浓缩可提高免疫印迹的灵敏度。
    ③IBT法在临床应用中存在一定的局限性：不同分子量的蛋白质出现电泳距离一致的条带；IBT法一般不能检出针对构象依赖表位的抗体，造成某些抗体漏检。

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