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简答题简述PCR的原理和引物设计原则。
  • 1.PCR又称聚合酶链反应，是一种在体特异性外扩增目的核酸的的酶促合成反应。其基本原理是：在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，利用DNA半保留复制和其在不同温度下变性复性的特性，人为控制温度——高温变性，低温复性，室温延伸，循环多次后，特异性扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
    2.引物设计原则是1. 长度为15~30个核苷酸2. 碱基随机分布，G+C的含量为45~55%
    3.避免发夹结构的形成，引物的存在连续互补序列不超过3bp
    4.引物之间不应存在互补序列，避免3 ′端互补重叠
    5.引物的碱基序列与非扩增区域无同源性
    6.引物3 ′端碱基一定与模板配对，最佳碱基选G和C ；
    7.引物5 ′端可以修饰，如加酶切位点，突变位点，起始密码子，终止密码子等。

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