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简答题简述λ噬菌体载体的克隆原理及一般步骤?
  • 原理:载体和外源DNA经酶切后,外源DNA片段插入到载体的适当位置,或置换载体的填充片段。连接形成重组子在体外噬菌体蛋白作用下,包装形成噬菌体颗粒,通过噬菌体颗粒感染大肠杆菌将重组DNA注射到宿主中,经过裂解生长,可增殖重组DNA。
    步骤:
    ①通过裂解过程增殖载体
    ②回收、分离纯化载体
    ③载体与外源DNA的酶切
    ④外源DNA与载体的连接
    ⑤重组噬菌体的体外包装
    ⑥包装噬菌体颗粒感染宿主
    ⑦筛选。
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