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简答题用于DNA重组的载体应具备什么条件?常用的载体有哪一些?各有何特点?
  • .DNA重组载体应具备的条件:
    (1)能自主复制;
    (2)具有一种或多种限制性内切酶的单一切割位点,并在位点中插入外源基因后,不影响其复制功能;
    (3)具有1~2个筛选标记;
    (4)克隆载体必须是安全的,不应含有对受体细胞有害的基因,并且不会任意转入其他生物细胞;
    (5)易于操作,转化效率高。
    常用的基因载体有以下几种:
    (1)质粒:是细菌染色体以外的小型环状双链DNA分子,本身有复制功能,且带有某些选择信息,但可插入的目的基因片段较小。
    (2)噬菌体DNA:是一种病毒DNA,能插入比较大的外源DNA片段,在DNA分子上有多种限制性核酸内切酶识别位点,便于多种外源DNA酶切片段的克隆。
    (3)黏粒
    (4)柯斯质粒载体和酵母人工染色体:前者结合了质粒和 噬菌体载体的优点,也是一种环形双链DNA分子,具有质粒的性质,可以转化大肠杆菌,并自行复制和增殖,但它不会产生子代噬菌体,构建成的此种载体较小,因此能插入比较大的外源DNA片段,所以被广泛地用于构建基因组文库。后者既含有大肠杆菌来源的质粒复制起始位点,又含有酵母菌染色体DNA着丝点,端粒和复制起始位点的序列,以及合适的选择标记基因,可在转化的酵母菌细胞内,按染色体DNA复制的形式复制重组DNA,容纳外源DNA片段的能力比前3种载体大得多。
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