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简答题简述固定化原生质体的制备方法与特点。
  • 固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的原生质体称为固定化原生质体。
    （1）固定化原生质体的制备包括原生质体的制备和原生质体固定化两个阶段。
    ①原生质体的制备：一般来说，原生质体的制备过程是首先将对数生长期的细胞收集起来，悬浮在含有渗透压稳定剂的高渗缓冲液中；然后加入适宜的细胞壁水解酶，在一定的条件下作用一段时间，使细胞壁破坏；分离除去细胞壁碎片、未破坏的细胞以及细胞壁水解酶，而得到球状原生质体。
    ②原生质体固定化：原生质体固定化：原生质体制备好后，把离心收集到的原生质体重新悬浮在含有渗透压稳定剂的缓冲液中，配成一定浓度的原生质体悬浮液，然后采用凝胶包埋法制成固定化原生质体。
    （2）、固定化原生质体具有下列显著特点：
    ①由于没有细胞壁，细胞结构不完整，失去增殖能力，但是由于细胞膜内的结构完整，保持了细胞原有的新陈代谢特性。
    ②固定化原生质体由于解除了细胞壁这一扩散屏障，可增加细胞膜的通透性，有利于氧气和营养物质的传递和吸收，也有利于胞内物质的分泌，可显著提高产率。
    ③固定化原生质体由于有载体的保护作用，具有较好的操作稳定性和保存稳定性，可反复使用和连续使用较长时间，利于连续化生产，在4˚C保存较长时间后仍能保持其生产能力。
    ④固定化原生质体易于何发酵产物分开，有利于产物的分离纯化，提高产品质量。
    ⑤固定化原生质体发酵的培养基中需要添加渗透压稳定剂，以保存原生质体的稳定性。这些渗透压稳定剂在发酵结束后，可用层析或膜分离技术等方法与产物分离。

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