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简答题PCR引物设计的原则主要有哪些？
  • （1）引物长度：10～30Nt；
    （2）碱基分布：A、T、G、C随机分布；
    （3）G+C含量：40%～60%Tm=4（G+C）+2（A+T）；
    （4）引物之间：避免3′端互补；
    （5）引物自身：不应形成二级结构；
    （6）引物3′末端碱基：最好选T、C、G，不选A；
    （7）引物5′末端碱基：可不与模板DNA互补。

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