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简答题设计一个从土壤中分离产淀粉酶菌株并进行诱变育种的方案。
  • (1)从土壤中分离纯化产淀粉酶菌株依据:①采样可选淀粉丰富的地点;②通过资料检索找到并设计一个理想的培养基配方,该配方的唯一碳源应该设计为淀粉,能在该培养基上生长,并有淀粉水解圈产生的菌株即为筛选的目的菌株;③分离好氧菌所以采用好氧方式的平板分离培养或液体分离培养;④采用简便迅速,有一定准确性的检出方法,提高筛选效率。如利用淀粉酶分解圈的大小鉴别各菌株的淀粉酶分泌能力(可用碘液测试)。在平板上⑤挑取多个有生产潜力的菌株(水解圈较大的细菌单菌落),并在平板上多次纯化,然后4摄氏度斜面保存。然后4摄氏度斜面保存。
    (2)高产淀粉酶菌株的诱变育种,采用初筛和复筛方案进行诱变鉴定: ①诱变:选择合适诱变源,可采用物理诱变和化学诱变相结合的复合诱变方式。 具体操作过程中要遵循这样一些原则:①使用简便有效的诱变剂;②选用优良的出发菌株;③处理单细胞或单孢子悬浮液④使用最佳诱变剂量 剂量 = 强度(浓度)× 作用时间 相对剂量 = 杀菌率;⑤利用协同效应;⑥寻找和利用形态、生理与产量间的相关指标;⑦设计高效率筛选方案;⑧根据具体情况创造新型筛选方案。 ②初筛:以淀粉水解圈为指标,在平板上做定性、半定量的测定,观察突变株的生理效应范围。选留较多有生产潜力的菌株。 ③复筛:经初筛对少量生产潜力大的菌株的代谢产物量作精确测定。可用摇瓶发酵模拟生产测定其淀粉酶活,筛选产酶能力强的菌株。 ④遗传稳定性鉴定:筛选出的菌株,要经过多次传代之后,再进一步在鉴定其产生淀粉酶的能力是否发生了变化。如果产生了回复突变,则需要重复诱变筛选过程,直至到筛选出遗传稳定的高产菌株为止。
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