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简答题试述生物样品分析中免疫分析法的分类及内容。
  • 免疫分析中按标记物的不同,可分为放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、荧光免疫分析等。根据抗原-抗体的反应达平衡后是否需将结合物(B)与游离标记物(F)分离,免疫分析可分为均相免疫分析和非均相免疫分析两大类。
    各种免疫分析的基本原理是一样的,即竞争抑制原理。人工抗原的制备和特异抗体的制备也相同,只是标记抗原(标记药物)的标记物不同,由此产生的测定方法也不同。
    放射免疫分析是20世纪50年代末开始发展起来的一种超微量分析技术,它是利用放射性同位素的测量方法与免疫反应基本原理相结合的一种同位素体外检测法。本法最早应用于血浆中微量胰岛素的分析,这一方法不仅用于测定大分子量、有抗原性的蛋白质、酶等生物活性物质,而且也广泛用于测定许多小分子量、本身无抗原性的药物和代谢物等,许多RIA药盒已商品化。
    酶免疫分析是20世纪70年代在RIA基础上发展起来的一种新的免疫分析方法。将抗原抗体特异反应与酶的高效专一催化特性相结合,用酶代替放射性同位素来标记药物,具有无放射性危害,标记物衰退期长和仪器设备简单等优点,随着研究进展,EIA的灵敏度已达到甚至超过RIA,凡RIA能测试的项目几乎均可用EIA来替代。     标记酶的作用也是提供可测信号,但酶本身并不能直接发出信号,必须要有其他物质如酶底物、辅酶等的参与才能完成酶反应,引起吸收光谱等方面的变化以供检测。
    按照测定过程中,抗原-抗体反应是在单一液相中进行还是在液固相中进行,可将EIA分为均相酶免疫分析法和非均相酶免疫分析法。
    一些化学物质在氧化时会发出光量子,这种氧化反应称化学发光,具有这种性质的分子称化学发光分子,用它标记抗原或抗体,以达到测定抗体或抗原为目的的标记免疫技术,称化学发光免疫测定法。自1976年Schroeder等首先建立了生物素CLIA后,激素等众多物质的CLIA也相继建立,并在不断发展中。CLIA也有均相与非均相两种类型。
    荧光免疫分析是以荧光物质或潜在荧光物质为标记物,当标记的药物与特异抗体相结合时,发生荧光强度的改变,或在相应的酶作用下发生荧光来检测待测样品中药物浓度的一种方法。也可分为均相与非均相两类,均相荧光免疫分析能自动化操作,是目前应用比较广泛的免疫分析法。按标记物产生荧光方式不同,可将荧光免疫分析分为底物标记荧光免疫分析、荧光偏振免疫分析、荧光淬灭和荧光增强免疫分析等。
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