试题详情
- 简答题设计试验，构建小鼠发情期卵巢组织的cDNA文库。
- （一）从小鼠发情期卵巢组织中提取总RNA，（常用异硫氰酸胍苯酚法，可以使破碎细胞和灭活RNA酶同步进行）得到的总RNA流经oligo（dT）纤维素柱时，在高盐缓冲液作用下（目的是稳定核酸双链），mRNA被特异地吸附在柱上，逐渐降低盐浓度，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA被洗下，经过两次oligo纤维素柱，就可以得到较纯的mRNA。
（二）cDNA第一链的合成利用反转录酶的催化作用，以mRNA为模板，oligo（dT）为引物，合成与mRNA互补的cDNA链。
（三）cDNA第二链的合成cDNA第一链合成完成后，得到了DNA-RNA杂交分子，用碱变性法，去除杂交分子中的RNA。进一步用DNA聚合酶I和反转录酶合成第二条链。
（四）cDNA与接头连接机与载体连接
（五）质粒的转化或噬菌体的包装及转染
（六）cDNA文库的扩增
（七）cDNA文库的筛选与鉴定 关注下方微信公众号，在线模考后查看
热门试题