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简答题试以蛋白质在pH梯度介质中的移动行为说明聚焦效应的形成原理。
  • 在流动过程中，当pH刚高于pI时，蛋白带负电荷，与交换剂结合，移动速度显著减慢。当pH梯度下降至使该处pH低于pI，蛋白带正电荷，不与交换剂结合，而随洗脱液快速移动。如此多次重复而达聚焦、分离目的。
    如果一种蛋白质加到已经形成pH梯度的层析柱上时，将迅速移动到与其等电点相同的pH处。从此位置开始，蛋白质以缓慢的速度进行吸附、解吸附，直到pH小于pI时被洗出。
    若在此蛋白洗出之前再加入第二份同种蛋白样品时，后者将在洗脱液的作用下快速向前移动，而不被固定相吸附，直到其移动到近似本身等电点环境处。然后两份样品以同样的速度移动，最后同时从柱底流出。

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