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简答题简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。
  • 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法，是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术，为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
    免疫印迹法程序可分为5个步骤：
    （1）蛋白样品的制备；
    （2）经过SDS-PAGE分离样品；
    （3）分离的蛋白转移到膜载体上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
    （4）用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
    （5）洗去未结合的一抗，加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。

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