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简答题阐述DNA重组HOLLIIDAY模型中蛋白的作用。
  • 主要蛋白:RecA, RecBCD, RuvA, RuvB and RuvC。 RecA:是多功能的动力蛋白。链交换ATP酶活性,蛋白酶活性,有352个氨基酸残基,分子量为38kDa。在大肠杆菌的DNA重组中是必不可少的。RecA蛋白与单链DNA结合,每一个RecA蛋白可与4-6个核苷酸结合。蛋白质与核苷酸形成的复合体由5-3运动。这个复合体是相当稳定的,半衰期为30min,并且有促进链交换的活性。每个蛋白单体通过N末端alpha螺旋与相邻的单体结合,形成一个六聚体。
    只要有以下条件RecA就可以促进DNA链的交换:两个DNA分子都必须有可以使RecA结合的单链区。两个分子必须有同源区,DNA链的长度不小于50pb。同源区必须有自由末端,这能够成为链交换的起始点。
    RecBCD://由recb、c、d基因分别编码而成。
    RecBCD有五种酶活性:核酸外切酶,解旋酶,核酸内切酶,ATP酶,单链DNA核酸外切酶活性。 解旋酶活性解旋DNA缠绕比缠绕生成更快。能使单链DNA成环。
    与双链DNA结合并且自然地分开两条链。当RecBCD碰到Chi序列时,活性发生改变。RecD亚单位被释放出来,RecBC作为解旋酶酶在ATP依赖的反应中解开DNA。
    生成的单链DNA可以用作链交换和重组反应。
    RuvA:四聚体,识别Holliday连接,协助RuvB解旋酶促进分支移动。可以调节链交换。
    RuvB:一种解旋酶可以催化HJ分支的移动。但本身却不能和DNA有效结合。与RuvA连结发生作用。 与其他解旋酶一样,RuvB是一个六聚体,但与其他解旋酶不同的是,RuvB只与双链结合不与单链结合。有ATP酶活性。
    RuvC://用于切开Holliday中间体。可以把四条链中的两条链切开。由于结合是对称的,RuvC可以和链以两种等同的方式结合。所以Holliday中间体可以被两种不一样却等同的方式切开。识别HJ的位点为(A/T)TT (G/C)。
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