试题详情
简答题请论述λ-DNA载体的构建策略是什么。
  • （1）λ-DNA载体的构建：缩短长度，野生型λ-DNA包装的上限为51kb，本身长度为48.5kb，只有当插入的外源DNA片段不大于2.5kb时，才能被包装成有感染力的噬菌体颗粒。因此缩短野生型λ-DNA的长度，可以提高装载量。其实野生型λ-DNA上约有40-50%的片段是复制和裂解所非必需的（除去非必需区段，除去左右两臂必要区域中的限制位点代以MCS，插入选择位点如Lac）。根据切除的多少，可将λ-DNA分成两大类载体：插入型载体，取代型载体。
    （2）λ-DNA载体的构建：删除重复的酶切位点，野生型的λ-DNA链上有5个EcoRI位点和7个HindIII位点，不利于重组操作，必须删除至1-2个，同时，为了便于各种来源的DNA片段的克隆，还需要增加一些单一的酶切位点除了简单的切割外，还需要采用定点突变技术去除或增添酶位点。
    （3）λ-DNA载体的构建：加装选择标记，与质粒不同，野生型λ-DNA上缺少合适的选择标记，因此加装选择标记是λ-DNA克隆载体构建的重要内容λ-DNA克隆载体上的选择标记主要有下列两类：免疫功能类标记，颜色反应类标记。
    （4）λ-DNA载体的构建：构建琥珀密码子的突变体，琥珀型突变（sup）是指由CAG（Gln）向UAG（stop）的突变。大肠杆菌的某些菌株含有特异性的校正基因，其编码产物校正tRNA能专一性地纠正这一突变。将野生型λ-DNA上D和E两个头部包装蛋白的基因中的CAG密码子突变成UAG。当这种λ-DNA进入一般的大肠杆菌菌株后，不能合成有活性的头部蛋白，也就不能被包装和裂解细菌，这样就可以阻止有害重组体的生物污染及扩散，而基因工程实验中使用的受体菌则是具有琥珀型突变体校正功能的菌株。

  • 关注下方微信公众号，在线模考后查看

热门试题