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简答题什么是同聚物加尾连接法？用何种方法加尾？具有哪些优缺点？
  • 所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA（dG）和dT（dC.，然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3’-OH上。以Mg2+作为辅助因子，该酶可以在突出的3’-OH端逐个添加单核苷酸，如果用Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3’-OH端逐个添加单个核苷酸。
    同聚物加尾法实际上是一种人工黏性末端连接法，具有很多优点：
    （1）首先不易自身环化，这是因为同一种DNA的两端的尾巴是相同的，所以不存在自身环化。
    （2）因为载体和外源片段的末端是互补的黏性末端，所以连接效率较高。
    （3）用任何一种方法制备的DNA都可以用这种方法进行连接。
    同聚物加尾法也有一些不便之处：
    （1）方法繁琐；
    （2）外源片段难以回收。由于添加了许多同聚物的尾巴，可能会影响外源基因的表达。另外要注意的是，同聚物加尾法同平末端连接法一样，重组连接后往往会产生某种限制性内切核酸酶的切点。

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