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- 简答题变性高效液相色谱法
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DHPLC的填料由一个具有惰性物化性质的固定相和PS-DVB微孔球共价连接而成,采用具有疏水性的又带正电荷的TEAA作为“桥分子”,使DNA片段能够被吸附在固定相上。DHPLC的流动相为有机溶剂乙氰,双链DNA分子被吸附在固定相上,通过改变流动相中乙氰的浓度,不同片段长度的DNA分子被逐步洗脱,从而实现DNA片段的分离。洗脱下来的DNA片段一般通过紫外检测,波长254nm,而不需要进行费时的凝胶电泳分析。
当柱温<50℃时,根据双链DNA分子的链长度来的分离。当70℃>柱温>50℃时,根据双链分子的序列进行分离,这时可用于杂合双链分子与纯合双链分子的分离。当柱温>70℃时,依据单链DNA分子的碱基组成和片段长短进行分离。 关注下方微信公众号,在线模考后查看
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