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- 简答题写出pUC18/19的基本结构，说明其克隆筛选的基本方法。
- P.UC18是适合于双脱氧法DNA测序的载体，通常运用于重组dna的分子克隆中，首先我们制备大肠杆菌的感受态细胞（能接受外来重组的dna），这种感受态菌株必须不同外来DNA分子发生遗传重组，通常是rec基因缺陷型的突变体，同时它们必须是限制系统缺陷或限制与修饰系统均缺陷的菌株，即具有具有这三种缺陷（rkmkrec），同时对氨苄青霉素敏感（ap）。puc18载体自身带有抗氨苄青霉素基因，而外源片段不具有，这样只有带有puc18的转化子的菌株才能在氨苄青霉素平板上存活，而外源片段自身环化的不能存活，这称为抗性筛选。
P.UC18上带有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列，在这个编码区中插有一个多克隆位点，且不影响正常功能，DH5α感受态菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分序列的编码信息，当puc18载体在正常情况下同感受态菌株融合后，互补表达具有酶活性的蛋白质，称为α-互补现象，当有外源片段插入多克隆位点后，互补现象消失，其形成的菌株颜色具有很大的差异，很容易鉴别，这种筛选方法称为α-互补现象筛选。由上可见，puc18载体除了能重组导入外源片段外，在筛选表达过程中还具有重要的作用
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