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简答题什么是酶的体外定向进化，原理及一般流程。
  • 酶的体外定向进化，又称实验分子进化，属于蛋白质的非合理设计，它不需事先了解酶的空间结构和催化机制，通过人为的创造特殊的条件，模拟自然进化机制（随机突变、重组和自然选择），在体外改造酶基因，并定向选择出所需性质的突变酶。
    原理：在待进化酶基因的PCR扩增反应中，利用TaqDNA聚合酶不具有3’->5’校对功能的性质，配合适当条件，以很低的比率向目的基因中随机引入突变，构建突变库，凭借定向的选择方法，选出所需性质的优化酶（或蛋白质）。从而排除其他突变体。
    流程：
    1.因的选择：选择编码所需蛋白质的DNA序列
    2.变或重组：通过易错PCR引入随即突变或DNAShuffling等方法增加基因序列的多样性。
    3.变基因文库的构建：将获得的突变重组基因插入到表达载体中的构建突变库。
    4.变体酶的表达：将载体转入受体细胞表达变异酶。
    5.的基因鉴定：利用筛选和选择方法确定有益的特性克隆。
    6.离改良基因并重复上述过程，直至获得所需性质的蛋白质。

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