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简答题多倍体的应用主要体现在哪几方面？
  • 1、染色体计数法（贝类染色体制片法）
    用担轮幼虫制备染色体标本（以皱纹盘鲍为例）
    受精卵在25℃条件下培养6~8h，取上浮担轮幼虫，用0.01%的秋水仙素（用于制备中期染色体）溶液浸泡处理2~3h；离心5min（1000r/min）；用0.075mol/L的KCl预低渗10min，离心5min（1000r/min），再用0.075mol/LKCl低渗30min，离心5min（1000r/min）；用卡诺固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）预固定15min，离心5min（1000r/min）；重复固定4次（每次15min）；置于-18℃冰箱中储存过夜（>12h）；离心5min（1000r/min）；加50%冰醋酸1~2滴解离1~2min；滴片前用固定液（甲醇：冰醋酸=1：1）固定；在50℃灯箱上进行热滴片；自然干燥后，用Giemsa染液染色1h；用蒸馏水冲洗后，在空气中干燥；镜检统计染色体数。
    2、细胞核体积测量
    一般认为，真核细胞的核大小与染色体数目成正比，同时细胞核与细胞质在细胞中总是维持较稳定的核质比。因此，细胞及细胞核体积的大小可用于染色体倍性鉴定。根据细胞核或细胞的体积即可确定其倍性。计算公式：核面积=πab/4；核体积=4/3πab2或=ab2/1.91式中，a为短轴长度，b为长轴长度。
    二倍体与三倍体红细胞核体积预期比值为1：1.5，核面积预期比值为1：1.3，二倍体与四倍体红细胞核体积预期比值为1：1.74。
    3、极体计数法
    因为三倍体的诱导是通过阻止第一极体或第二极体的排出而完成的，所以三倍体合子只有一个而不是两个极体。具体方法是在显微镜下观察卵子的动物极有没有极体释放。该方法在大扇贝和珍珠贝中很有效，但对于早期胚胎极体不易观察的种类则需通过组织学方法观察极体的释放。
    4、DNA含量测定方法
    （1）流式细胞仪检测
    用DNA-RNA特异性荧光染料（如DAPI）对细胞进行染色，在流式细胞仪上用激光或紫外光激发结合在DNA上的荧光染料，检测每个细胞的荧光强度，其强度与DNA含量成正比，与已知的二倍体细胞或单倍体细胞（如同种的精子）荧光强度对比，判断被检查细胞群体的倍性组成。
    （2）显微荧光测定法
    将被测材料用固定液固定后，将组织用细胞匀浆仪弄碎，使细胞游离，制成涂片标本，或者采取血液制成血涂片。标本用DAPI染色，然后在显微分光光度计上，通过波长365nm的紫外线照射，用扫描测光装置测定细胞核的荧光强度，获得处理组个体和对照组个体之间细胞核DNA相对含量曲线，从而测出二者的DNA比率，即可确定处理组个体的倍性，进而计算出三倍体的诱发率。

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