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简答题基因表达系列分析的原理及其基本过程。
  • 基因表达系列分析（serial analysis of gene expression，SAGE）以逆转录产物cDNA上特定区域的9-11bp特异寡核苷酸序列作为标签（tag）来代表各转录物；用连接酶随机串联将多个标签（20-60个）并克隆到载体中，建立SAGE文库；通过对标签的序列分析，获得基因转录的分布以及表达丰度，从而充分了解基因转录组的全貌。SAGE的基础是能特异性代表转录物并含有足够信息的标签。
    SAGE的基本过程是：
    （1）先Oligo（dT）将mRNA逆转录获得单链cDNA，然后以生物素标记的、核心序列为tag的特异性引物单链扩增获得双链cDNA（不改变基因表达丰度）；
    （2）用锚定酶（anchoring enzyme，AE）-一般采用具有4bp识别位点的限制性核酸内切酶NlaIII消化；
    （3）消化后通过生物素与抗生物素蛋白结合分离cDNA，得到的cDNA片段分为两组，分别与接头A和B连接（接头A和B5’端分别为NlaIII粘性末端，3’端分别为非NlaIII的某限制性酶粘性末端），二者分别含有PCR引物A和B互补结合序列；
    （4）经T4DNA连接酶连接cDNA片段，形成两端分别带有连接子A、B的标签二聚体；
    （5）以引物A和B（应稍长于接头A和B，覆盖完整的NlaIII位点及其旁侧保护序列）扩增二聚体，产物再以锚定酶消化，纯化后连接成为标签二聚体的串联体，可长达30-40EST，克隆到载体上，进行DNA序列测定。一种标签的丰度即反映相应转录物的转录水平。可获得疾病组织中基因表达的全貌；或与正常组织对照分析，发现新的疾病基因或相关基因，并确定特定基因在疾病发生中的作用。

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