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简答题简述革兰氏染色的操作步骤及原理。
  • 原理:革兰氏染色反应与细胞壁的结构与组成有关。经过结晶紫和碘液复染,菌体内形成深紫色的结晶紫-碘复合物,对于革兰氏阴性细菌,这种复合物可用酒精从细胞内浸出,而阳性菌不容易浸出。因为阳性菌在用酒精脱色时细胞壁肽聚糖层脱色,网孔缩小以至关闭,组织“结晶紫-碘”复合物外逸,从而保留初染的紫色,而阴性菌用酒精脱色后,可引起脂质物质溶解,细胞壁透性增大,复合物溶出,菌体呈现番红复染的红色。
    步骤:1.涂片,用灭菌过的接种环挑取少许菌体,放在载玻片一段的水滴中,涂成均匀的薄层
    2.初染,滴加结晶紫染色液,染色1min,然后水洗至无紫色
    3.媒染,用碘液冲去残余水后吸干,然后用碘液媒染1min,水洗
    4.脱色,用95%的酒精脱色30s左右,立即水洗
    5.复染,滴加番红染色,染色3-5min,水洗后吸干
    6.镜检,低倍镜找到标本后,再用油镜观察染色后的细菌
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