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简答题简述TGGE/DGGE的基本原理。
  • 在TGGE中，随着温度的逐渐升高时，DNA分子会呈阶梯式逐步发生解链。部分解链的双链DNA分子表现出一种复杂的分枝构像，使得其电泳迁移率大大下降。DNA分子的解链决定于该分子的解链温度（Tm），而Tm有强烈的序列依赖性，如在单取代突变中，若是A：T（两个氢键）被G://C（三个氢键）取代，将增加该双链DNA分子的Tm值。而整个DNA分子序列对解链温度也有影响，若A：T被T：A替代，或G://C被C://G替代，分子的解链温度也会发生改变。因此不同的DNA分子由于其Tm不同，将于不同凝胶位置（温度不同）产生分枝（解离）使电泳迁移率降低，从而在凝胶上的不同位置形成条带。
    DGGE的变性条件为热（一般为60℃的恒定温度）和固定比率的甲酰胺（0－40％）、尿素（0－7M）。这些梯度变性的功能就相当于TGGE中的温度梯度的功能，使不同DNA分子在不同的凝胶部位发生解链，引起迁移率下降，从而将不同的DNA分子分离。

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