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简答题碱裂解法制备质粒DNA的方法有哪些？
  • （1）接种菌落于含抗生素的LB中，37℃剧烈振荡反应；
    （2）培养液4℃12000rpm30min离心；
    （3）重悬细菌于100μl冰预冷的溶液I（50mM葡萄糖25mMTris-HCL（pH8.0），10mMEDTAPh8.0）中剧烈振荡；（4）加200μl亲配制液溶液II（0.2MNaOH1%SDS），混合内容物，不要振荡，置冰上；
    （5）加150μl冰预冷溶液III（5MKac60ml，冰乙酸11.5ml，水28.5ml），温和振荡10s置于阔步3-5min；
    （6）40℃。12000rpm离心5min，转移上清；
    （7）上清加等量酚；氯仿抽提，4℃，12000rpm离心2min，收集上清；
    （8）加入2倍体积乙醇，振荡混合，室温放置2min；
    （9）4℃，12000rpm，离心5min，弃上清；
    （10）倒置离心管，倾干液体；
    （11）1ml70%乙醇4℃洗涤沉淀，弃上清，空气中干燥10min；
    （12）用500μl含无DNA酶的胰RNA酶（20μg/ml）的TE重新溶解核酸，振荡，贮于-20℃。

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