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简答题PCR介导的定点诱变法。
  • PCR介导的定点诱变法是一种高效定点诱变方法。其基本原理是：除了合成所需的5ˊ端及3ˊ端常规引物（a，d）之外，再合成一对带有诱变位点的互补寡核苷酸引物（b，c），具体步骤如图所示。分别利用诱变引物b和5ˊ端引物a，以及诱变引物c和3ˊ端引物d，扩增出两个诱变的DNA片段（a/b片段和c/d片段）。经去除扩增反应的剩余引物后，将扩增出两个诱变的DNA片段（a/b片段和c/d片段）等量混合、变性、退火，用Klenow DNA聚合酶补齐。再利用5ˊ端及3ˊ端引物（a，d）进行PCR扩增反应，从而得到所需的含诱变位点的DNA片段。

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