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简答题何谓Km？试比较V-[S]作图法和双倒数作图法求Km的原理及优缺点。
  • ⑴V-[S]作图法
    以底物浓度为横坐标，反应速度为纵坐标作图，求出最大反应速度。根据Km的定义，最大反应速度一半时所对应的底物浓度即为Km。由于反应速度只能接近Vmax，而永远达不到最大速度，所以最大速度的一半不易求得，用该法求得的Km不太准确。
    ⑵双倒数作图法
    该法是将米氏方程转化为倒数方程：
    1/V＝Ｋm/Vmax*[S]+1/Vmax
    以1/[S]为横坐标，以l/V为纵坐标作图，所得直线在纵坐标上的截距代表最大反应速度的倒数（l/Vmax），而在横坐标上的截距代表一l/Km。由于代表底物浓度低的点往往偏离直线较远，因而影响了Km和Vmax的精确测定。尽管这些方法有一定的缺点，但仍作为目前实验室较常用的方法。

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