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简答题目的基因克隆的基本方法有哪些？
  • （1）直接从染色体DNA中分离：
    仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离，较少采用。
    （2）人工合成：
    根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。
    （3）从mRNA合成cDNA：
    采用一定的方法钓取特定基因的mRNA，再通过逆转录酶催化合成其互补DNA（cDNA），除去RNA链后，再用DNA聚合酶合成其互补DNA链，从而得到双链DNA。这一方法通常可得到可表达的完整基因。
    （4）利用PCR合成：
    如已知目的基因两端的序列，则可采用聚合酶链反应（polymerase chainreaction，PCR）技术，在体外合成目的基因。
    （5）从基因文库中筛选：
    首先建立基因组或cDNA文库，利用探针从文库中筛选目的克隆。

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