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简答题请设计一个实验确定某基因的启动子区？
  • （1）利用绿色荧光蛋白（GFP）基因作为报告基因，对启动子在受体细胞中调控基因表达的活性进行检测：采用基因枪法对受试细胞进行遗传转化，培养24h后在荧光显微镜下观察GFP基因的表达情况，并通过软件测定不同培养条件下GFP基因表达后的荧光强度，以较为准确的鉴定该启动子的活性大小，并达到鉴定与量化的目的。—GFP是一些腔肠动物所特有的生物荧光素蛋白，GFP在其他原核或真核细胞中，在紫外光或蓝光激发下都发出绿光，即发射团的形成无物种特异性，也不需要特异的辅助因子。
    （2）利用核酸酶S1作图：三种不同的核酸酶—S1核酸酶、RNA酶、外切核酸酶VII可用来进行RNA定量确定内含子位置及鉴定在，克隆的DNA模板上mRNA的5`-末端和3`-末端的位置。含有目的mRNA的RNA样品与互补的DNA或RNA探针在利于形成杂合体的条件下温育。在反应末期，用核酸酶降解未杂合的单链RNA和DNA，余下的DNA-RNA或RNA-RNA杂合体用凝胶电泳分离，接着用自显影进行观察。当探针的摩尔数在杂交反应中过量时，信号强度与样品中目的mRNA的浓度成正比。可利用过量探针与系列定量的靶序列杂交作出标准曲线，从而准确估算出样品浓度。在真核系统中，S1核酸酶消化过的5`-末端通常代表转录起始点，而3`-末端代表聚腺苷酸化的位点。同样的策略可用来对拼接位点的5`-末端和3`-末端作图。

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