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简答题生产转基因动物的常用方法有哪些？各有何优缺点？
  • 六种方法：
    （1）原核期胚胎的显微注射技术，优点：有外源基因长度不受限制，可直接用不含原核载体DNA片段的外源基因进行转移；实验周期相对较短。缺点：大动物原核胚的胚胎胞质中含有大量的泡状颗粒，影响其透光性，且显微操作技术含量较高，需要特殊的仪器并可能在注射过程中对胚胎造成损伤等；外源基因能否整合到受体基因组中，要等到子一代出生后经过选择才能确定，这对生育周期长，产仔少的大动物来说，效率就很低，而且整合位点随机，易造成宿主基因组内生命活动所必需的基因失活和导致胚胎或动物死亡；整合一般是指多拷贝首尾串联相接，不利于研究基因结构、功能及表达调控。
    （2）反转录病毒技术，优点：感染率高，易转染，操作简单，而且多数为单拷贝，并可稳定的整合到可识别插入位点。缺点：反转录病毒作为载体，其插入的外源基因最大不能超过10KB，并且容易产生嵌合体。另外，插入的外干扰源基因容易丢失，反转录病毒本身的DNA序列也会干扰外源基因的表达。还有反转录病毒在安全方面仍存在问题。
    （3）慢病毒载体技术，优点：高效的转染率和转基因的高表达。缺点：插入外源基因需小于8.5kb和插入突变，经传代整合后所得原病毒DNA易发生甲基化，影响外源基因表达。
    （4）精子载体技术，优点：简单易行，直接可以用精子作为外源DNA载体进行基因转移。可以对大量的精子细胞进行处理，不损伤卵母细胞，在短时间内生产转基因胚胎，而且整合率高，成本低。缺点：结果不稳定，有的外源DNA并未整合到宿主的基因组中，而是以附加体的形式存在于染色体之外，由于存在于正常的细胞有丝分裂中，附加体丢失的概率很高。
    （5）体细胞核移植转基因技术，优点：动物转基因效率大幅提高，体细胞克隆技术可将基因整合和生产胚胎分开操作，有利于使用基因打靶技术。缺点：克隆技术的效率有待提高。
    （6）胚胎干细胞介导技术，优点：可以将外源基因整合到细胞的染色体组中，然后把这些干细胞经过筛选，找到理想的干细胞，大大减少了整合突变率，还可以消除随机整合产生的位置效应的影响。

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