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简答题利用细胞工程制备人源性单克隆抗体的方法主要有哪些？它们的优势与难点何在？
  • 主要有：EB病毒转化技术，人－鼠杂交瘤单克隆抗体，人－人杂交瘤单克隆抗体，利用基因组工程构建转人Ig基因组小鼠，严重免疫缺陷小鼠制备人单克隆抗体。
    优势和难点：
    1、利用类似于疱疹病毒的EB病毒在体外直接感染人外周血淋巴细胞，使之转化获得永生能力得到人B淋巴细胞系，这些细胞可在体外分泌人抗体。
    2、人－鼠杂交瘤的单克隆抗体分泌性能不稳定，多数情况下由于人染色体的丢失导致杂交瘤细胞失去分泌抗体的能力。
    3、人－人杂交瘤单克隆抗体可供利用的人骨髓瘤细胞种类非常有限，人的骨髓瘤细胞在融合率、非分泌型方面仍不及小鼠骨髓瘤细胞，而且人不能像小鼠那样进行高度免疫，B淋巴细胞常限于取自外周血（小鼠取自动物脾脏），激活状态不适合做融合；故人－人杂交瘤细胞在融合、融合后的筛选以及融合细胞分泌抗体方面仍不理想。
    4、基因组工程构建转人Ig基因组小鼠：改造过的抗体除了构成抗原识别与抗原结合部位的三个互补决定区（CDR）是鼠源的以外，其余部分均是人源的。以后仅需免疫小鼠制作单克隆抗体，但获得的是人抗体而非小鼠抗体。该技术难度较大，但已有成功的报道。
    5、严重免疫缺陷小鼠制备人单克隆抗体：将人免疫干细胞移植到SCID小鼠体内，SCID小鼠获得了人的免疫系统。这种小鼠可用任何抗原免疫，从激活的淋巴细胞中富集抗原特异性人源性B淋巴细胞，进一步进行细胞融合或制备抗体库。

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