试题详情
简答题简述包含体形成的原因和包含体蛋白复性的主要步骤。
  • 重组蛋白在细菌中表达时，尤其当表达目的蛋白量超过细菌体总蛋白量10%时，会在细胞内与细菌杂蛋白、核酸等成分聚集成没有生物活性的直径0.1-0.3μm的固体颗粒，这种不溶性聚合体即包含体（inclusion body）。
    生成包含体的原因可能有是蛋白质合成速度太快，多肽链相互缠绕，影响了多肽链的正确折叠，导致疏水基团外露等。
    （包含体的形成有利于防止蛋白酶对表达蛋白的降解，并且非常有利于分离表达产物。但包含体形成后，表达蛋白不具有生物活性，因此必须溶解包含体并对表达蛋白进行复性。）
    包含体复性即从伸展态－中间体－后期中间体－天然态的过程，操作步骤一般为用超声波、匀浆等使菌体破碎后，离心得到包含体－加入强蛋白质变性剂如6～8mol／L盐酸胍或9～10mol／L尿素溶解包含体－用透析、稀释和超滤复性法等等方法使之正确折叠。

  • 关注下方微信公众号，在线模考后查看

热门试题