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简答题叙述DNA改组的步骤和原理。 
  • D.NA改组是指DNA分子的体外重组,是基因在分子水平上进行有性重组(sexual recombination)。通过改变单个基因(或基因家族, gene family)原有的核苷酸序列,创造新基因,并赋予表达产物以新功能。
    D.NA改组的步骤和原理:
    (1)错误倾向PCR:通过改变传统PCR反应体系中某些组分的浓度,或使用低保真度的DNA聚合酶等,使碱基在一定程度上随机错误引入而创造序列多样性文库。
    (2)自身引物PCR:DNA片段重叠部分两互补链的3‘端彼此配对,各作为引物,以互补链为模板向前延伸,然后以同样的方式与互补链配对延伸,直至合成全长的基因。
    (3)重组合PCR:用基因5、和3、端引物将上述经重组合的全长基因扩增出来,即可用于表达和选择。
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