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简答题SDS-PAGE上样缓冲液成分有哪些?各有何作用?若无此成分电泳会出现什么问题?
  • SDS-PAGE上样缓冲液成分有:SDS、还原试剂(二硫苏糖醇或β-巯基乙醇)、溴酚蓝和甘油。
    (1)SDS:是一种阴离子去污剂,作为变性剂和助溶剂。SDS使蛋白质本身的电荷变化被屏蔽,氢键被断裂,疏水相互作用被取消,多肽被去折叠(二级结构被破坏),最后形成椭球形。如果不加,会使电泳条带出现拖尾、纹理现象;
    (2)还原试剂:使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂,蛋白质完全去折叠,只根据亚基分子质量分离。如果不加,在高分子质量范围会产生“鬼带”;
    (3)溴酚蓝:指示剂,用于指示样品的迁移过程,如果不加,则无法看到样品的迁移过程;
    (4)甘油:使样品沉入孔底。如果不加,会使样品漂移影响电泳效果。
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