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简答题各种色谱分离（共价、聚焦色层分离、凝胶过滤、亲和）的机理是什么？
  • （1）共价作用色层分离法：是利用溶质分子与层析剂凝胶之间的共价吸附作用将目的产物与其他溶质分子分离开来的一种层析方法。首先要制备层析剂，具有共价反应活性的二硫键层析剂可用葡聚糖凝胶或琼脂糖胶作材料制得，有谷胱甘型二硫键层析剂和巯基丙基型二硫键层析剂等。
    （2）聚焦色层分离法：利用蛋白质分子或其他两性分子等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离纯化。两性物质如蛋白质等混合物上好样后，用洗脱缓冲液淋洗，蛋白质随其下移至各自的等电点聚焦，移动速度明显减缓，最后按等电点顺序流出柱外。
    （3）凝胶色谱：以凝胶为固定相，根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术，因而又称为分子筛色谱、空间排阻色谱或尺寸排阻色谱。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构的物质，凝胶每个颗粒的微细结构如一个筛子。
    （4）亲和色谱作为色谱分离的一个分支，对生物大分子化合物的分离纯化具有特别重要的意义。众所周知，生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性。把与目的产物有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，当含有目的产物的混合物（流动相）流经此固定相时，即可把目的产物从混合物中分离出来。

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