A、不匹配的粘末端可通过部分填补后连接。

B、同聚尾法连接不仅连接效率高，也易回收插入的片段。

C、限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS终止液抑制限制酶活性，将有利于重组连接。

D、Mg²⁺-ATP是T4DNA连接酶反应时的必须因素。

E、平末端连接时，在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率。