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简答题真核表达调控的顺式作用元件有哪些？其作用特点是什么？
  • 顺式作用元件为一些能与DBP结合的特定序列的DNA片段，决定转录起始位点和RNA聚合酶的转录效应，按功能可分为启动子、增强子、沉默子、衰减子和终止子等DNA序列片段。
    启动子：真核基因启动子是基因表达时与基因转录起始有关的5’端DNA序列，包括在-30bp区富含有AT的典型TATA盒（框）（TATA box）和在-70～-80bp区域（在TATA box上游）启动元件。前者是引导RNA聚合酶Ⅱ在正确起始位点转录mRNA所必需的DNA序列，即保证转录的精确起始。后者UPE是调节转录起始频率和提高转录效率的调控序列，后者的序列常为GGTCAAT和GGGCCC序列，称为GC box，它们经协同作用，以调控基因的转录效率。
    增强子：增强子是使启动子的基因转录效率显著提高（增强转录活性）的一类顺式作用元件，其本身不具有启动子活性，是由多个独立的，具有特征性的核苷酸序列所组成。其基本的核心组件常由812bp组成，以单拷贝或多拷贝串联的形式存在。增强子一般有以下特性：⑴增强子能提高同一条DNA链上基因转录的速率；⑵增强子对同源或异源基因都有效 ⑶增强子的位置可在基因5’上游、3’下游或内部；⑷无方向性，增强子从5’→3’或是从3’→5’均可对启动子发挥作用；⑸增强子可远离转录起始点；⑹增强子一般无基因特异性，对各种基因启动子均有作用，但具有组织或细胞特异性。
    典型的增强子首先发现于SV40的病毒中，为SV40的早期基因增强子，约200bp，含2个72bp的重复序列，位于早期启动子上游，增强子可促使病毒基因转录效率提高100倍，因此具有这一增强子的载体已得到了广泛的应用。些年来，来自于Rous肉瘤病毒基因长末端重复序列和人类巨细胞病毒（CMV）增强子也已被广泛用于真核细胞的基因表达。增强子能增强启动子的转录能力，有效的增强子能促进转录达10倍或100倍以上，在某些情况下，表达产物可能具有细胞毒效应。因此，最好使用一种可被外界刺激信号诱导表达外源基因的诱导型启动子，诱导型启动子有热休克启动子、金属硫蛋白启动子、糖皮质激和固醇类激素诱导的启动子，热休克启动子的诱导可通过提高细胞的培养温度使启动子转录水平提高，重金属离子可有效地促进金属硫蛋白启动子的转录活性。
    R.NA剪接信号：多数高等的真核基因都含有内含子序列，在细胞核内转录产生的前体mRNA要经过剪接过程去掉内含子顺序后才成为成熟的mRNA分子。虽然许多基因的cDNA转入哺乳类动物细胞后，其表达不受有或无内含子的影响，但有些基因在真核细胞中表达需要有内含子的存在。一般来说，在哺乳动物细胞的表达载体中最好有一段内含子序列的剪接信号，以提供外源基因cDNA表达的需要。常用的内含子剪接序列有SV40的小t抗原的内含子序列等。
    负调控元件：沉默子和衰减子是抑制基因转录的DNA序列，称为负调控元件，它们与反式作用因子相互结合而起作用。这些负调控元件不受距离和方向的限制，并可对异源基因表达起作用。
    终止子和polyA信号：核基因转录的确切终止信号和终止机制，目前尚不清楚，终止过程不是在RNA聚合酶指导下完成的，在不明机制下发生转录终止。现在已发现模板DNA分子的3’端有转录终止信号序列，称终止子。通常由转录产生的具有polyA尾的基因终止信号是在多聚腺苷酸化位点下游的一段长度为数百个碱基的DNA区域内的G/T簇，例如在SV40中的AGGTTTTTT的DNA序列为终止转录调控元件。一般转录终止子为发夹结构的反向重复序列。现在基因工程表达载体上所使用的转录终止子都是病毒基因或细胞基因的3’端的一段序列，其中也包括3’端不翻译区。如SV40小t抗原和β-球蛋白的转录终止片段常用于构建真核基因表达载体。
    在双启动子的表达载体中，启动子的转录方向为同向时，上游启动的转录由于会穿过下游启动子，这样就使得下游的转录受到极大的影响，造成下游转录水平的下降，但是如果在两个启动子间插入一个转录终止子后，上游启动子对下游启动子的影响就被消除了，这样下游启动子的表达量会有明显提高。当两个启动转录方向相反时，基因表达可能会被转录形成的反义RNA所抑制，这时插入转录终止子将会消除这种抑制作用。

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