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简答题简述单克隆抗体的主要技术路线。
  • 单克隆抗体的制备：①动物免疫与亲本细胞的选择；②细胞融合：淋巴细胞杂交瘤的制备；③杂交瘤细胞的筛选：有限稀释法等；④单克隆抗体的制备和冻存；⑤单克隆抗体的纯化
    亲本细胞的选择：①骨髓瘤细胞：一般不分泌抗体，能在体外无限繁殖和连续继代培养，且为HGPRT－（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）或TK－（胸腺嘧啶核苷激酶）缺陷。多用BALB/C小鼠的骨髓瘤细胞。②淋巴细胞：经过免疫处理的淋巴细胞，多用大鼠或小鼠。③免疫方法：对细胞或微生物抗原可直接注射如小鼠体内，可溶性蛋白抗原可与等量的福氏完全佐剂混合乳化后，注入到动物体内。
    细胞融合：将免疫脾细胞和小鼠骨髓细胞以2：1或10：1的比例混匀于50ml锥形离心管内，1200rpm离心；10分钟，尽量吸净上清液，用手指轻击管壁，使管底沉淀的细胞铺展成薄层，在室温条件下边轻轻振摇离心管边在60秒钟内逐滴加入50%的PEG0.5ml，随后静置90秒，再于5分钟内边振摇边逐滴加入5－10ml不含血清的培液或盐水缓冲液，以终止PEG的作用，再静置10分钟。
    HAT培养基筛选杂交瘤细胞：细胞团块分散后，加HAT溶液，即可加入有饲养细胞的96孔塑料培养板内每孔0.1ml，用HAT选择性培养时隔4－5天换液，8-10天后可以选择检测。
    HAT选择系统：HAT是含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤A.及胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养基，其中三种成分与细胞DNA合成有关。

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