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简答题有哪些方法可以使外源DNA与载体DNA相连接，比较它们的优点。
  • 外源DNA片段与载体DNA分子的连接，即DNA分子的体外重组，主要依赖于限制性内切核酸酶及DNA连接酶的作用。 外源DNA片段与载体DNA分子的连接有多种。一种是用用两种不同的限制酶同时酶解一种特定的DNA分子，产生具有两种不同末端（粘性末端与另种粘性末端、粘性末端与平齐末端）的DNA片段，那么可实现外源DNA片段定向插入载体分子。另一种是非互补粘性末端DNA分子的连接，即在一定的反应条件下，可用T4 DNA连接酶将平齐末端的DNA片段有效地连接起来；对于非互补粘性末端DNA分子，在用特异作用干单链DNA的S1核酸酶处理，使其变成平齐末端后，也可用 T4 DNA连接酶进行有效的连接。其三，可采用附加衔接物（linker，是一种人工合成的双链DNA短片段，其上具有一个或数个在将与其连接的载体DNA上不存在的限制酶识别位点，可按平齐末端连接法给平齐末端片段加上相同识别位点的衔接物，再用在衔接物中具有识别位点的合适限制酶切割，用常规方法连接）的方法，提高平齐末端间的连接作用效率。其四，可利用接头进行DNA平齐末端门的连接。接头（adaptor）是一种具有粘性末端的短核昔酸双链，它与平齐末端连接后，不用经过切割即可与载体相连。这些方法是在不同的情况下发挥作用的，谈其所谓的“优点”有些牵强。应根据具体研究对象的特点和研究目的，灵活选用。

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