试题详情
- 简答题试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。
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（1）引物的长度一般15～30bp；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定重要条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40%～60%为宜，A、T、G、C最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4）避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3′端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物；
（5）引物3′端的碱基必须与模板严格配对，而且尽量不要为A，最好选择T，因为3′端末位为T时错配几率大大降低；
（6）产物有或能加上合适的酶切位点；
（7）被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。 关注下方微信公众号，在线模考后查看
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