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简答题测定酶活力应注意什么,为什么测定酶活力时以测定初速率为宜,并且底物浓度远远大于酶浓度?
  • 酶的催化作用受测定环境的影响,因此测定酶活力要在最适条件下进行,即最适温度、最适pH、最适底物浓度和最适缓冲离子强度等。只有在最适条件下测定才能真实反映酶活力的大小。
    随时间的延长,酶促反应中底物浓度降低,产物浓度增加,加速逆反应的进行,产物对酶抑制或激活作用以及随时间的延长引起酶本身部分分子失活等,酶促反应速率降低,因此测定活力,应测定酶促反应的初速率,从而避免上述种种复杂因素对反应速率的影响。
    底物浓度太低时,5%以下的底物浓度变化实验上不易测准,所以在测定酶的活力时,往往使底物浓度足够大,这样整个酶反应对底物来说是零级反应,而对酶来说却是一级反应,这样测得的速率就比较可靠地反映酶的含量。
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