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简答题试述蛋白质工程的主要步骤。
  • 蛋白质工程主要步骤如下：
    ⑴新蛋白质结构的设计根据已知蛋白质或酶的化学结构、空间结构及其特性，确定欲得到的新蛋白质或酶的氨基酸排列次序，确定欲置换的氨基酸及位置。
    ⑵突变基因的核苷酸序列的确定根据欲得到的蛋白质的氨基酸序列，确定其对应的mRNA上的核苷酸序列。再根据互补原则，从mRNA核苷酸序列确定其所对应的突变基因上的核苷酸序列。根据欲置换的氨基酸确定需要置换的核苷酸及其位置。
    ⑶突变基因的获得根据欲得到的突变基因的核苷酸序列以及需要置换的核苷酸位置，首先用DNA合成仪合成有一个或几个核苷酸被置换了的寡核苷酸。再用此寡核苷酸为引物，通过定点突变（Site directed mutagenesis）技术，而获得所需的突变基因。这称之为寡核苷酸诱导的定位突变，是蛋白质工程中常用的技术。
    ⑷新蛋白质的产生将上述获得的突变基因插入到合适的基因载体中，转化或转导到宿主细胞之中，在适宜的条件下进行表达，就可产生出经过氨基酸置换的新的蛋白质或酶。

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