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- 简答题探针的标记法有哪些?
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探针的标记法?
答:1、缺口平移法:此法是利用适当浓度的DNaseⅠ在DNA双链上随机切割单链,造成单链切口。切口处产生一个5末端和3末端,3末端就可以作为引物,在大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下,以互补的DNA单链为摸板,依次将dNTP连接到切口的3末端的羟基上,合成新的DNA单链;同时DNA聚合酶Ⅰ的5→3的核酸外切酶活性在切口处将旧链从5末端逐步切除,新合成链不断延伸,从而使原DNA分子上的部分核苷酸残基被标记的核苷酸所取代。
2、随机引物法:随机引物是人工合成的长度为6个寡核苷酸残基的寡聚核苷酸片段的混合物。对于任何一个用作探针的DNA片段,随机引物混合物中都会有一些六核苷酸片段可以与之结合,起到DNA合成引物的作用。将这些引物与变性的DNA单链结合后,以4种dNTP(其中一种是标记物标记的dNTP)为底物,合成与探针DNA互补的切带有标记物的DNA探针。
3、PCR标记法:在PCR反应底物中,将一种dNTP换成标记物标记的dNTP,这样标记的dNTP就在PCR反应的同时掺入到新合成的DNA链上。
4、末端标记法:只是将DNA片段的一端进行标记。 关注下方微信公众号,在线模考后查看
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