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简答题试述生物样品分析的常用测定方法有哪些。    
  • （1）光谱法
    采用具有选择性的显色剂和反应条件，才可以不经分离提取，直接用比色法测定生物样品中的药物含量。比色法灵敏度不高，通常只能测定出1μg/mL浓度以上的样品。但该法快速、简便，对仪器设备要求不高。
    荧光法具有较高的灵敏度，专属性也较强，但药物必须具有一定的化学结构才能产生荧光。药物中具有天然荧光者不多，通常需采用适当处理，常用化学引导荧光法，如紫外辐射氧化、水解或强酸脱水等，或用适当的荧光试剂与药物起偶合或缩合反应，产生荧光发生团。
    （2）色谱法
    经典的薄层色谱定量法，操作比较繁琐，准确性较差。不适用于体液中药物成分浓度的测定。高效薄层色谱法灵敏度较高，常用于生物样品中成分的测定，与气相色谱法、高效液相色谱法相比，也有其独特的优点，
    高效液相色谱法在生物样品内药物分析中的应用已大大超过了其他分析方法。具有适用范围广，可在室温下进行；样品预处理简单；分离效率高，流动相选择范围广；可不经萃取和衍生化处理直接测定极性大的水溶性药物；检测方法多是非破坏性的，流出组分可回收；专一性较高等优点。
    气相色谱法只要选择适当的色谱条件，母体药物、代谢物及其可能同时服用的其他结构相类似的药物都能得到很好分离，常作为建立其他生物样品内药物分析方法的参比方法。
    高效毛细管电泳法有高压电泳的高速、高分辨率及高效液相色谱法的高效率等优点，其选择性与高效液相色谱有很大的互补性。广泛应用于生物大分子，体内药物及代谢物，手性药物，中、西药物及其制剂等的分析。
    （3）联用技术
    联用技术已广泛应用于复杂组分的分离与分析，成为分析技术中最重要的检测手段，尤其适合于对热不稳定的、挥发性差的或极性大的成分分析，高分辨的液相色谱与高灵敏度的质谱联用分析，特别适用于复杂生物样品中药物及其代谢物的研究。
    （4）免疫分析法
    免疫分析中按标记物的不同，可分为放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、荧光免疫分析等。根据抗原-抗体的反应达平衡后是否需将结合物（B）与游离标记物（F）分离，免疫分析可分为均相免疫分析和非均相免疫分析两大类。 各种免疫分析的基本原理是一样的，即竞争抑制原理。人工抗原的制备和特异抗体的制备也相同，只是标记抗原（标记药物）的标记物不同，由此产生的测定方法也不同。

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