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简答题何谓盐析?其原理是什么?常用的盐析方法有哪些?影响盐析的主要因素有哪些?盐析操作时常用的盐是什么?
  • (1)盐析法是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异,通过向溶液中引入一定数量的中性盐,使目的物或杂蛋白以沉淀析出,达到纯化目的的方法。
    (2)原理:盐溶现象和盐析作用 盐析作用的原理是:
    破坏双电层:在高盐溶液中,带大量电荷的盐离子能中和蛋白质表面的电荷,使蛋白质分子之间电排斥作用相互减弱而能相互聚集起来。
    破坏水化层:中性盐的亲水性比蛋白质大,盐离子在水中发生水化而使蛋白质脱去了水化膜,暴露出疏水区域,由于疏水区域的相互作用,使其沉淀。
    (3)影响盐析的因素
    ①无机盐的种类
    盐析用盐的选择:盐析作用要强
    盐析用盐需有较大的溶解度 盐析用盐必须是惰性的 来源丰富、经济
    ②溶质(蛋白质等)种类:Ks、β
    ③溶质(蛋白质等)浓度:2~3%
    ④温度
    ⑤pH
    (4)盐析中常用的盐:硫酸铵、硫酸钠、磷酸钾、磷酸钠。
    硫酸铵是最常用的蛋白质盐析沉淀剂
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