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简答题易错PCR的技术目的和策略有哪些?(调整dNTP浓度、增加Mg2+浓度、添加Mn2+等)
  • 易错PCR是一种迅速、简便的在DNA序列中进行随机突变的方法,主要特点是能够控制它的突变频率。用PCR扩增目的基因时,通过使用低保真度的TaqDNA聚合酶或改变PCR常规的反应条件,如调整dNTP浓度、增加Mg2+浓度、添加Mn2+等,引起碱基以某一频率进行随机错配而引入多点突变,构建突变体库,然后选择或筛选出所需的突变体。
    目的:将一轮PCR扩增得到的有用突变基因作为下一轮的模板进行PCR扩增,连续反复进行随机诱变,结果使每一轮获得的小突变可以积累大部分的有益突变。
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